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市场监管总局办公厅关于发布4-氯双异丁酚丁执法检验方法的通知 市监稽发〔2025〕93号
各省、自治区、直辖市和新疆生产建设兵团市场监管局（厅、委）： 近期，总局在组织查办宣称“减肥”功能食品非法添加有毒有害物质案中发现，违法分子在食品中非法添加新型衍生物4-氯双异丁酚丁。根据案件查办和行刑衔接工作需要，总局组织检验检测机构制作了执法检验方法，并组织专家进行了认定。 为便于市场监管部门办理此类案件，现将《食品中4－氯双异丁酚丁的执法检验方法》印发给你们。根据《中华人民共和国食品安全法》和有关司法解释等相关规定，检验检测机构可以采用上述检验方法对涉案食品进行检验，检验结果可以作为案件定性裁量和定罪量刑的参考。 附件：食品中4－氯双异丁酚丁的执法检验方法 市场监管总局办公厅 2025年10月29日
食品中 4-氯双异丁酚丁的执法检验方法
1范围 本方法规定了食品中4-氯双异丁酚丁的高效液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于蜜饯、果冻、糖果、果蔬粉、饼干、代用茶、液体饮料、果酒和配制酒中 4-氯双异丁酚丁的测定。
2原理 试样经甲醇提取，采用高效液相色谱-串联质谱仪检测，外标法定量。
3试剂和材料 除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯，水为符合GBT6682规定的一级水。 3.1试剂 3.1.1 甲醇(CHOH):色谱级。 3.1.2 甲酸(HCOOH):色谱级。 3.2 试剂配制 3.2.1 50%甲醇溶液:量取甲醇(3.1.1)500mL，加水稀释至 1000mL，混匀备用。 3.2.2 0.05%甲酸水溶液:量取甲酸(3.1.2)0.5mL，加水稀释至1000mL，混匀备用。 3.3 标准品 4-氯双异丁酚丁[化学名称为(5-氯-2-氧代吲哚啉-3,3-二基)双(4,1-亚苯基)二异丁酸酯，名 4-氯双异丁酚汀]标准品，纯度>94%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子量等信息见附录A。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液(1000 mgL):准确称取 4-氯双异丁酚丁标准品适量(相当于有效成分10mg,精确至 0.01mg)，加甲醇(3.1.1)溶解，然后转移至 10mL 容量瓶中，用甲醇(3.1.1)定容至刻度，配制成质量浓度为1000mg的标准储备液。-18℃及以下避光贮存，有效期3个月。 3.4.2 标准中间溶液(10.0mgL):准确移取1000mg儿的标准储备液(3.4.1)0.50mL于50 mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)稀释至刻度，摇匀，配制成标准中间溶液，质量浓度为10.0mg儿。0~4 ℃避光保存，有效期1个月。 3.4.3 标准系列工作溶液:准确吸取标准中间溶液(3.4.2)适量，用50%甲醇溶液(3.2.1)配制成标准系列工作溶液,质量浓度为2.00ng/mL、5.00 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100ng/mL，或依仪器响应情况配制适当浓度的标准工作液。若样品基质效应较强，可采用空白基质提取液配制适当浓度的基质标准系列工作溶液，临用现配。 3.5 材料 3.5.1微孔滤膜:0.22mm，聚四氟乙烯滤膜。
4仪器和设备 4.1 高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI) 4.2 天平:感量分别为0.01mg和1mg。 4.3 超声波清洗器。 4.4恒温水浴锅。 4.5 离心机:转速>4000r/min。 4.6涡旋混合器。
5 分析步骤 5.1试样制备和保存 取50g试样或所有试样(低于50g时)，糖果(除胶质糖果)、果蔬粉、饼干、代用茶样品研磨或粉碎混匀，蜜饯取可食部分剪碎至2mm以下，胶质糖果加热融化后混匀，果冻样品充分搅碎至浆状，含二氧化碳的液体样品通过加热或超声去除二氧化碳。制备好的试样根据样品储存条件进行存储。 5.2 样品前处理 称取 1.0g(精确至 0.001 g)样品于 25 mL具塞刻度离心管中，加入 20mL甲醇(3.1.1)，超声提取 10min(超声过程中摇匀 2~3 次)，涡旋振荡10min，冷却至室温，用甲醇(3.1.1)稀释至刻度并摇匀。取5ml溶液经4000r/min离心5min，精确吸取1.0mL离心后上清液，用水稀释至2mL，涡旋混匀后用微孔滤膜(3.5.1)过滤，待高效液相色谱-串联质谱仪测定。 5.3仪器参考条件 5.3.1色谱条件 a）色谱柱:C18柱，100mm×2.1mm，1.8 um，或性能相当的色谱柱。 b）流动相:A为0.05%甲酸水溶液(3.2.2)，B为甲醇(3.1.1)，梯度洗脱程序见表1。 c）流速:0.3 mL/min。 d）柱温:30℃。 e）进样量:5 μL。e) 表1梯度洗脱程序表
5.3.2质谱参考条件 a)离子源:电喷雾离子源(ESI)。 b）检测方式:多反应监测(MRM) c)扫描方式:正离子模式。 d)干燥气、雾化器、鞘气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量等参数使用前应优化至最佳灵敏度，定量离子对和定性离子对等信息见附录B。 5.4标准曲线的制作 将标准系列工作溶液(3.4.3)分别注入高效液相色谱一串联质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作溶液中目标化合物的质量浓度为横坐标，以目标化合物的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液的色谱图参见附录C。 5.5 试样溶液的测定 5.5.1定性测定 按照高效液相色谱一串联质谱条件(5.3)测定试样溶液和标准工作溶液，记录试样和标准溶液中目标化合物的色谱保留时间和定量离子与定性离子的相对离子丰度。当试样中化合物色谱峰保留时间与标准溶液的色谱保留时间相对偏差不大于2.5%，且定量离子与定性离子的相对离子丰度与浓度相当标准溶液中相对离子丰度比(k)偏差不超过表2规定的范围，则可确定试样中存在对应待测物。 表2相对离子丰度的最大允许偏差
5.5.2定量测定 将试样溶液(5.2)按仪器参考条件(5.3)进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测物的浓度。试样溶液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超出标准曲线范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释。
6空白试验 除不加试样外，其他操作与试样操作一致。
7结果计算 试样中待测物的含量按式(1)计算: X=c×V×V₂ /（m×V1×1000）………………（1） 式中: X--试样中4-氯双异丁酚丁的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); c--试样溶液中4-氯双异丁酚丁的质量浓度，单位为纳克每毫升(ngmL); V--定容体积，单位为毫升(mL); V--移取离心后上清液稀释后的体积，单位为毫升(mL); m--试样称取的质量，单位为克(g); V--移取离心后上清液的体积，单位为毫升(mL); 1000--换算系数。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留三位有效数字。
8精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15%。
9其他 当取样量为 1.0g，定容体积为 25 m时，移取体积 1.0mL 并稀释至2mL，4-氯双异丁酚丁的检出限为 0.03 mgkg，定量限为0.10mg/kg。空白试验应无干扰。 |
