附 录 B （资料性） 快速诊断试纸条的制备（以免疫胶体金标记为例） B.1 仪器设备 B.1.1 高速冷冻离心机：离心力不低于10000g。 B.1.2 喷膜仪：有划膜和喷金功能，喷量精度0.1 μL。 B.2 试剂和耗材 B.2.1 抗疟原虫抗体。 B.2.2 兔IgG或鼠IgG。 B.2.3 羊抗兔IgG或羊抗鼠IgG。 B.2.4 胶体金。 B.2.5 牛血清白蛋白（BSA）：5%～10%。 B.2.6 表面活性剂：十二烷基苯磺酸钠等。 B.2.7 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐（Tris-HCl）：0.1 M，pH 9.0。 B.2.8 玻璃纤维膜。 B.2.9 吸收垫（吸水纸）。 B.2.10 硝酸纤维素膜：孔径8～10 μm，液体移行速率不低于10 mm/min。 B.2.11 聚氯乙烯（PVC底板）。 B.2.12 塑料外壳。 B.3 步骤 B.3.1 样品垫的制备 用样品垫工作液浸泡或喷涂玻璃纤维素膜后，干燥备用。 B.3.2 结合垫的制备 搅拌烧杯中的示踪物（胶体金）溶液并调节pH，缓慢加入经超纯水稀释的待标记抗体（抗疟原虫抗体、兔IgG或鼠IgG），室温反应并不时缓缓搅拌，反应结束后加入足量BSA封闭。离心后弃上清，沉淀用胶体金稀释液重悬，铺制在玻璃纤维素膜上干燥备用。 B.3.3 检测线及质控线的制备 用超纯水清洗喷膜仪，调试参数，连接进出口管线，将T、C管线分别放入抗疟原虫抗体溶液和羊抗兔IgG或羊抗鼠IgG溶液中，调节喷速和走膜速度，将检测线和质控线喷至硝酸纤维素膜上，然后放入干燥箱干燥。 B.3.4 试纸条的组装与包装 将样品垫、结合垫、制备好检测线及质控线的硝酸纤维素膜、吸收垫按照附录B在PVC板上组装成试纸条大板（图B.1），用裁切刀裁切成条，将试纸条装入塑料外壳内（图B.2）。 B.3.5 裂解液的制备 配制含表面活性剂的Tris-HCl作为样本裂解液。
图 B.1 免疫层析试纸条组装示意图
图 B.2 条卡型疟原虫抗原检测快速诊断试纸条外观示意图 |
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