5.4 限值试验 在本项试验中，如在一个不低于1000mg/kg BW/d的剂量组未产生可观测到的毒性效应，且依据结构相似化合物已有信息预测未提示受试物具有毒性时，可考虑不必进行3个剂量水平的试验。但预期人体暴露量需要更高剂量（大于1000mg/kg BW/d）研究的情形除外。 5.5 受试物给予 动物在试验前至少要在实验室饲养环境中适应5 d时间。给予受试物前24 h，将动物躯干背部受试物暴露区的被毛剪掉或剃除，并确保实验动物皮肤健康完整。一般要求试验期间每周对动物躯干背部的受试物暴露区进行去毛。在使用剪刀或剃刀进行去毛时应特别小心，以防损伤动物的皮肤从而引起皮肤通透性的改变。受试物暴露部位的面积约相当于动物体表面积的10%，且不得低于10%，应通过动物体重确定受试物暴露部位的面积。若受试物毒性较大，则可相对减小受试物暴露区域的面积，但受试物应尽可能薄而均匀地涂敷于整个受试物暴露区域。在给予受试物操作期间应采用合适的装置（如透气性胶带、纱布、无刺激性封闭套）封闭受试物暴露区域，以保证受试物与皮肤有良好的接触，并防止受试物脱落和动物舔食。 原则上实验动物每周7 d、每天经皮暴露6 h，连续至少90 d。若采用其他给予受试物方案（如每周5 d），应说明偏离标准方案的理由并提供支持性数据，明确论证所选方案能够满足研究既定目标。给予受试物结束后用温水轻柔擦拭受试物暴露部位皮肤，去除残留受试物；脂溶性受试物可先用植物油（如橄榄油、玉米油等）擦拭再用温水洗净。恢复期卫星组动物于给予受试物90 d后停止暴露。 5.6 观察指标 5.6.1 临床观察 观察时间至少为90 d。恢复期卫星组在实验结束后继续观察至少28 d（具体时限应根据观察到的效应适当调整），不作任何处理，以了解毒性作用的可逆性、持续性及迟发性。每日应至少观察动物1次，观察时间段尽量相同，或在预期毒性反应出现的时间段观察，记录毒性反应的症状、发生时间、持续时间等。如果出现毒性反应，则应适当增加每日观察次数。试验期间，对体质弱的动物应分笼饲养，对濒死或死亡动物应及时观察并尽可能地采集标本进行检测，并分析原因。 观察应至少包括如下内容：皮肤和被毛的改变，眼和黏膜变化，呼吸、循环、植物神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等改变。应计算每周饲料消耗量，记录每周体重变化。 5.6.2 眼科检查 在首次给予受试物前、末次给予受试物后及恢复期观察结束时，至少应对最高剂量组和对照组动物进行眼科检查，若发现眼部变化则应对所有动物进行检查。 5.6.3 临床检查 试验结束后，动物应禁食（不同动物品系采用不同的禁食期），麻醉后采血用于血液学、血液生化检查。 5.6.3.1 血液学检查 在中期观察结束（如有设置）、试验结束、恢复期结束时进行检查。应测定血细胞比容、血红蛋白浓度、红细胞计数、网织红细胞计数、白细胞计数和分类、血小板计数、凝血功能（如凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间，必要时可增加凝血酶时间和纤维蛋白原）。 5.6.3.2 血液生化检查 在中期观察结束（如有设置）、试验结束、恢复期结束时进行检查。血清或血浆检查指标包括电解质平衡、碳水化合物代谢、肝功能、肾功能等方面。具体指标包括：钠、钾、葡萄糖、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、尿素、尿素氮、肌酐、总蛋白和白蛋白、总三碘甲状腺原氨酸、总甲状腺素、促甲状腺刺激激素，以及至少两种反映肝功能的酶（如丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶和山梨醇脱氢酶等）。 根据受试物的毒性特征和临床表现，必要时可测定其他酶（肝脏或其他来源）、胆汁酸、总胆红素、其他激素（如睾酮、雌二醇、卵泡刺激素 、黄体生成素）。 如果受试物的已知特性可能或被怀疑会影响相关代谢谱，还应进行以下指标测定：钙、磷、甘油三酯、特定激素、高铁血红蛋白和胆碱酯酶等。 此外，还可根据所观察到的毒性作用进行其他更大范围的血液生化检查，以便进行全面的毒性评价。 5.6.3.3 尿液检查 一般不需要进行，只有当怀疑存在或观察到相关毒性作用时方需进行尿液检查。在试验结束时建议采用代谢笼收集动物尿液，记录尿液外观，测定尿比重、pH、尿蛋白、尿糖和潜血等。 |
鄂公网安备42011102005941号