伤寒和副伤寒诊断标准（WS 280—2026 ）

A.1.4.4 结果判定

A.1.4.4.1 增菌液结果判定

伤寒沙门菌阳性：沙门菌属荧光PCR和伤寒沙门菌荧光PCR同时阳性（即Ct值均≤33）。

甲型副伤寒沙门菌阳性：沙门菌属荧光PCR和甲型副伤寒沙门菌荧光PCR同时阳性（即Ct值均≤33）。

沙门菌阳性：仅沙门菌属荧光PCR阳性（Ct值≤33）。

A.1.4.4.2 菌落结果判定

伤寒沙门菌阳性：沙门菌属荧光PCR和伤寒沙门菌荧光PCR同时阳性（即Ct值均≤30）。

甲型副伤寒沙门菌阳性：沙门菌属荧光PCR和甲型副伤寒沙门菌荧光PCR同时阳性（即Ct值均≤30）。

沙门菌阳性：仅沙门菌属荧光PCR阳性（Ct值≤30）。

A.1.5 菌株管理

建立菌株保存档案，详细记录菌株的来源、分离的时间和地点、取材患者的基本信息及流行形式（暴发、散发等）。各级医疗机构所分离的菌株送辖区疾病预防控制机构进行复核鉴定。菌株保存、运输、管理按相关要求进行。

A.1.6 质量控制

实验室所用的培养基、试剂、诊断血清及试验过程等均要进行质量控制。

A.2 肥达反应

A.2.1 标本采集

宜在急性期和恢复期各采集一次血清，进行肥达反应试验。

A.2.2 原理

用标准伤寒及甲、乙、丙型副伤寒沙门菌O、H抗原菌液（诊断菌液）与稀释的待检血清反应，根据凝集效价判断血清中有无相应抗体。常用于辅助诊断。

A.2.3 试剂

伤寒及甲、乙、丙型副伤寒沙门菌诊断菌液。

A.2.4 方法

试管或凹塑板管外稀释法。或按照厂家说明书进行。

A.2.5 操作步骤

A.2.5.1 试剂制备

取伤寒及甲、乙、丙型副伤寒沙门菌诊断菌液，用生理盐水稀释成含菌1.0×10⁹/ mL悬液备用。

A.2.5.2 待检血清稀释

准备6支大试管，标明稀释度。

第1管：取9.5 mL生理盐水，加入0.5mL待检血清，混匀，制成1:20血清稀释液。

第2管：取第1管血清稀释液5 mL，加5 mL生理盐水，混匀，再取5 mL加至第3管。

第3管～第6管：同上步骤稀释。

此时第1管～第6管，稀释度分别为1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640（每次稀释时应更换吸头）。

A.2.5.3 分装待检血清稀释液

准备8排小试管，每排7支，或4×8凹塑板2个，标明稀释度及抗原。

各排第1管（孔）：每管（孔）加第1管血清稀释液0.5 mL。

各排第2管（孔）：每管（孔）加第2管血清稀释液0.5 mL。

各排第3管（孔）～第6管（孔）：同上步骤分装。

第7管（孔）：只加生理盐水作空白对照。

A.2.5.4 加抗原

将相应抗原（TO、TH、AO、AH、BO、BH、CO、CH）加入每排各稀释度管（孔）中，每管（孔）0.5 mL。最终血清稀释度分别为1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280。或按照厂家说明书进行相应抗原的稀释。

A.2.5.5 孵育

将已加好血清稀释液和抗原的试管（凹塑板）振摇混匀后，置36℃±1℃温箱或水浴孵育过夜，次日观察结果。

A.2.6 结果观察

轻轻取出试管或凹塑板，观察管（孔）底凝集物的多少及性状。阳性结果表现为液体澄清，颗粒均匀平摊于整个管（孔）底；阴性菌体集中一点，沉积于管（孔）底，与空白对照相同。以出现50%（++）凝集的血清最高稀释倍数作为该血清的凝集效价。

A.3 标本检验程序

见图A.1。

A.4 结果报告

A.4.1 病原学结果报告

根据生化试验或质谱或分子生物学鉴定和血清凝集结果，符合伤寒或副伤寒沙门菌的，报告“检出伤寒沙门菌”或“检出×型副伤寒沙门菌”。粪便、尿液、胆汁标本经分离培养后，如无可疑菌，报告“未分离出伤寒、副伤寒沙门菌”；血、骨髓标本培养至5 d或7 d如无细菌生长，报告“经5 d或7 d培养无菌生长”。无菌体液（血、骨髓、胆汁）中伤寒或副伤寒沙门菌核酸检测阳性，报告“××标本伤寒沙门菌核酸阳性”或“××标本×型副伤寒沙门菌核酸阳性”或“××标本沙门菌核酸阳性”。

A.4.2 血清学结果报告

报告被检血清对伤寒沙门菌O抗原、伤寒沙门菌H抗原、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌的凝集度。如果第1孔（管）无凝集，报告“＜1:40”；第6孔（管）呈“++”或更强凝集，报告“≥1:1280”。