伤寒和副伤寒诊断标准（WS 280—2026 ）

附 录 A

（规范性）

伤寒、副伤寒试验诊断方法

A.1 病原学检测方法

A.1.1 标本采集

A.1.1.1 血液标本

宜在病程的第1周～第2周采集。成人无菌采集静脉血5 mL～10 mL或按照血培养瓶说明书采集全血进行全血培养；婴幼儿及儿童采血量不应超过患者总血量的1%（一般3 mL～5 mL），具体采血量参考血培养瓶说明书。已用抗生素者可直接全血做培养(使用有抗生素吸附剂的血培养瓶进行细菌培养)，血液凝固者可取血凝块搅碎后做培养。为提高检测阳性率，可使用双相血培养瓶手工或者自动化培养，双位点（无菌采集病人两个位置静脉血）双瓶培养（需氧+厌氧培养）。

A.1.1.2 粪便标本

宜在病程的第3周～第4周采集患者新鲜粪便2 g～3 g或肛拭子立即送检。如不能在2 h内送检，可用卡里-布莱尔（Carry-Blair）运送保存培养基，在4℃冷藏条件下48 h内送检。为提高培养阳性率，也可视病人病程并结合临床症状（如第2周～第3周）采集血液与粪便同时进行培养。

A.1.1.3 骨髓标本

整个病程均可采集。已使用抗生素、其他标本培养阴性的疑似伤寒、副伤寒患者可做骨髓培养。

A.1.1.4 尿液标本

宜在病程的第1周～第2周采集，留取中段尿10 mL于无菌容器中及时送检。如不能在2 h内送检，在4℃冷藏条件下保存不超过8 h。

A.1.1.5 胆汁标本

利用十二指肠引流法或胆囊穿刺法或手术直接法无菌采集胆汁10 mL，直接注入血培养瓶中，血培养瓶于室温下尽快送检。

A.1.2 分离培养

A.1.2.1 血液标本

手工培养时，按1:10加入血液增菌培养基或葡萄糖胆盐肉汤培养基，置于36℃±1℃孵育，分别于1 d、2 d、7 d转种血平板或营养琼脂平板，置36℃±1℃培养24 h～48 h。自动化培养时，仪器信号报警提示有细菌生长时，取培养瓶内增菌液接种于血平板或营养琼脂平板，置36℃±1℃培养24 h～48 h；自动化细菌培养时间一般为5 d，对于已培养5 d的阴性瓶，一般不需常规盲传或终点转种，但临床诊断疑似伤寒感染者应常规盲传或终点转种，避免漏诊。

A.1.2.2 粪便标本

A.1.2.2.1 直接接种

取新鲜粪便标本直接接种于沙门菌显色培养基和麦康凯（MAC）琼脂培养基上，置36℃±1℃培养18h～24 h。直接接种同时应进行增菌培养。

A.1.2.2.2 增菌培养

取新鲜粪便标本1 g或肛拭子接种于9 mL亚硒酸氢钠增菌培养基（SF）或者亚硒酸盐煌绿增菌培养基（SBG）, 置36℃±1℃培养18 h～24 h后，接种到沙门菌显色培养基和MAC琼脂培养基上，置36℃±1℃培养18 h～24 h。

A.1.2.3 骨髓标本

取骨髓液做直接分离或增菌分离培养，方法同血液标本，见A.1.2.1。

A.1.2.4 尿液标本

将中段尿离心后取沉渣，加入7 mL亚硒酸氢钠增菌培养基（SF）或者亚硒酸盐煌绿增菌培养基（SBG）, 置36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h后，接种到沙门菌显色培养基上，置36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。

A.1.2.5 胆汁标本

将胆汁注入血培养瓶进行增菌分离培养，方法同血液标本，见A.1.2.1。

A.1.3 鉴定

A.1.3.1 菌落形态

在血平板和MAC培养基上形成中等大小、无色半透明、表面光滑的菌落，菌落边缘整齐。在沙门菌显色培养基上多形成中等大小、紫红色、表面光滑、边缘整齐的菌落，可参照培养基说明书进行鉴定。

A.1.3.2 形态染色

为革兰阴性短杆菌。

A.1.3.3 初步生化鉴定

从分离培养平板上挑取3个～5个可疑菌落，分别转种到以下培养基：双糖铁斜面（KIA）或三糖铁斜面（TSI）和动力-靛基质-尿素半固体（MIU）各一支，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h，观察生化反应（见表A.1）。