表 A.1 伤寒、副伤寒沙门菌初步生化鉴别表
A.1.3.4 系统生化鉴定 肠杆菌科细菌各属之间，在生化方面有类似之处，抗原方面也可有交叉反应，有时可出现不典型的菌株，因此，仅做一般生化反应和血清学鉴定，不能做出正确的结论，应进一步做系统的生化反应鉴定。可采用商品化的系统生化鉴定板条进行鉴定。伤寒、副伤寒沙门菌的主要生化特性见表A.2。系统生化不能区分乙型与丙型副伤寒沙门菌，仍应使用传统血清分型或分子血清分型方法确认。 A.1.3.5 质谱鉴定 除生化鉴定外，可疑菌落可进行质谱鉴定。质谱鉴定能够鉴定沙门菌属，但不能区分血清型。血清型鉴定仍应使用传统血清凝集试验或分子血清分型方法确定。质谱鉴定步骤严格按照厂家说明书进行。 表 A.2 伤寒、副伤寒沙门菌主要生化特性
A.1.3.6 分子生物学鉴定 除生化鉴定及质谱鉴定外，可疑菌落可利用分子生物学检测进行鉴定。分子生物学检测能够区分沙门菌属、伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌。具体方法见A.1.4。 A.1.3.7 血清玻片凝集 符合伤寒、副伤寒沙门菌生化反应或质谱、分子生物学鉴定为沙门菌的菌落，转种至营养琼脂36 ℃±1℃孵育18 h～24 h后做玻片凝集试验，并设生理盐水对照。 方法：挑取营养琼脂培养物，先用O多价血清玻片凝集，凝集者，再选用O2、O4、O6,7和O9因子血清凝集（伤寒和丙型副伤寒沙门菌的Vi抗原能阻碍O抗原凝集，必要时制成菌悬液经100 ℃水浴30min破坏Vi抗原后，取沉淀物再进行O血清凝集）。 O抗原确定后，将菌株点种于诱导琼脂或软琼脂平板上，36 ℃±1 ℃培养8 h～16 h后，用H因子血清凝集（见表A.3）。若未获得II相因子（若有），则使用对应的I相诱导血清因子进行软琼脂反相诱导，取琼脂边缘生长菌苔进行血清凝集试验确定II相因子。 沙门菌血清玻片凝集是传统血清分型方法，分子血清分型方法可作为补充，但需经过验证评估后使用。 表 A.3 伤寒、副伤寒沙门菌血清凝集反应
A.1.4 分子生物学检测 A.1.4.1 核酸制备 血液、骨髓、胆汁样本增菌液1 mL离心集菌，取菌沉淀用100 μL TE缓冲液悬菌后，经100 ℃水浴10min后离心，取上清，用作PCR反应模板。可疑单菌落悬于100 μL无菌纯水中，采用相同方法制备模板。也可使用商品化试剂盒按厂家说明书进行核酸制备。 A.1.4.2 荧光 PCR 引物 引物序列见表A.4，引物纯度宜为PAGE或HPLC级别。 表 A.4 沙门菌荧光 PCR 引物及反应条件
A.1.4.3 荧光 PCR 反应体系 荧光PCR反应体系见表A.5。可使用商品化试剂盒，按操作说明书进行操作。 表 A.5 沙门菌荧光 PCR 反应体系
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