关于发布《病原微生物菌（毒）种保藏质量控制通用标准》等2项推荐性卫生行业标准的通告

9.2培养要求

9.2.1 培养过程应在相应生物安全防护水平的实验室内进行。

9.2.2 使用的培养基其适用性和促生长能力应经过验证，并记录批号。必要时，使用前应进行无菌试验和促生长试验。

9.2.3 应严格控制培养条件，如温度、湿度、气体环境（CO₂、O₂浓度）、光照等，确保符合菌（毒）种的最佳生长要求，并进行实时监控和记录。

9.2.4 应对培养物的生长状态进行观察和记录，如生长曲线关键点、浑浊度、细胞病变效应、空斑形态、凝集特性等，并作为判断收获时机的依据和过程质控点。

9.2.5 应在适宜的培养阶段（如对数生长期、特定感染滴度平台期）收获菌（毒）种。

9.2.6 应充分混匀制备的菌（毒）种悬液，以保证后续分装的均一性。对于定量制备，应采用经过校准的浓度测定方法，如 CFU、TCID50、PFU 等。

9.3分装要求

9.3.1 根据不同使用要求，选择适宜的分装容器，如安瓿管、西林瓶、冻存管或试管等，确保其材质、密封性与保存条件兼容。

9.3.2 应在生物安全柜内分装，分装操作环境的洁净度应符合要求，并进行定期监测。

9.3.3 应明确每管/瓶的分装容量或目标浓度范围。分装时应确保悬液充分混匀，并使用经过校准的设备和方法进行分装，以保证每份具有均一性。对于定量菌（毒）种，需严格控制其分装体积和/或浓度的准确性。

9.3.4 对于需要密封的容器，应进行密封性检查，如通过目视检查、染料侵入法等，并进行抽检，确保分装后容器的密封完好，防止泄漏、污染或水分渗入。

9.4标识要求

9.4.1 分装后的菌（毒）种第一层包装应有牢固的标签。

9.4.2 标签内容应包括但不限于：菌（毒）种名称（中文和外文）、编号、批号、单位名称等。

9.4.3 标签材质和打印信息满足保存条件要求：

a) 在超低温和深低温保存条件下：标签应耐低温、粘贴牢固、防水抗撕裂、打印信息清晰不褪色、抗刮、防水、防油和抗溶剂；

b) 在其他保存条件下：应确保标签在相应温湿度环境下信息清晰、持久、不脱落。

9.5抽检要求

9.5.1 应对制备完成的每批次菌（毒）种进行抽检，抽检数量要求如下：

a) 非定量菌（毒）种：每批次抽检数量不少于 1 份；

b) 定量菌（毒）种：每批次抽检数量不少于 10%。

9.5.2 抽检项目应包括但不限于：

a) 纯度检验：应无污染（如无菌检查、支原体检测等）；

b) 活性检验：应具有活性，且符合预期（如 CFU、TCID50、PFU 等）；

c) 生物学特性鉴定：采用不少于 2 种方法检测关键特性，包括但不限于形态学、关键生化反应、血清学、分子生物学等，保证菌（毒）种制备前后质量一致；

d) 定量计数：应达到制备浓度或滴度的 50%～150%。

9.5.3 抽检不合格的批次应及时销毁，不应用于保藏或分发。

9.6真空冷冻干燥特殊要求

9.6.1 采用真空冷冻干燥方式制备的菌（毒）种，除满足本标准第 9.1 条～第 9.5 条要求外，还应进行真空度检测。

9.6.2 使用安瓿管制备的，应在不高于 4 mbar（或 400 Pa）的真空条件下进行熔封操作，并抽检熔封质量和真空度。如采用高频电火花真空测定仪测定真空度，若管内出现蓝紫色或蓝色光则符合要求，若无光说明尚未真空。

10 菌（毒）种保存要求

10.1应建立保存过程中避免菌（毒）种污染的管理制度与相关措施。

10.2应建立保存菌（毒）种所需的活性要求。用于保存的细菌菌种活性应≥10⁴CFU/mL，病毒毒种活性应≥10⁴TCID50/mL 或≥10⁴PFU/mL，真菌菌种活性应≥10⁶CFU/mL。

10.3保藏机构应根据需要建立种子批系统，如原始种子、主种子批、工作种子批三级种子库。应明确分区保存不同种子批的菌（毒）种，以及备份数量等要求。如原始种子保存数量不低于 2 份/株，主种子批不低于 10 份/株，工作种子批不低于 20 份/株。

10.4超低温保藏的菌（毒）种，应按照每 3 年～5 年 1 次频率进行抽检，抽检比例不低于保存数量的0.1 %。

10.5深低温保藏的菌（毒）种，应按照每 5 年～10 年 1 次频率进行抽检，抽检比例不低于保存数量的 0.1 %。

10.6冷冻干燥保藏的菌（毒）种，应按照每 10 年～15 年 1 次频率进行抽检，抽检比例不低于保存数量的 0.1 %。

10.7根据菌（毒）种生物学特性，抽检菌（毒）种的检测指标应不低于 3 项，包括但不限于：形态学、血清学、分子生物学等，并制定相应的检测技术操作程序。

11 菌（毒）种复苏要求

11.1基本要求

11.1.1 应制定菌（毒）种复苏纯度、活性验证制度，并记录验证结果。

11.1.2 应根据不同菌（毒）种的生长特性和保存方法，建立相应的复苏方法。

11.1.3 应根据不同菌（毒）种的种类及保藏方式，确定复苏时间并建立复苏程序文件。

11.1.4 复苏时，应选用适宜的国家标准菌（毒）株[或参考菌（毒）株]对复苏过程进行质量控制。

11.1.5 应填写复苏记录表，包括但不限于：复苏日期、复苏操作者、菌（毒）种编号、名称、代次、批次、数量、复苏方法等信息。

11.2对外提供用菌（毒）种复苏要求

11.2.1 应优先复苏工作种子批菌（毒）种。仅在特定情况下（如工作种子批耗尽或特定要求），经评估和审批后，方可复苏主种子批菌（毒）种。

11.2.2 复苏后用于对外提供的菌（毒）种，应进行活性检测，包括但不限于：生长试验、TCID50、PFU等和纯度（如无菌检查、支原体检测、分子特异性检测等）检测，并确保结果符合对外提供要求。