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——关于发布《食品安全国家标准 预包装食品标签通则》（GB 7718-2025）等50项食品安全国家标准和9项修改单的公告（2025年 第2号） 第47项
前言 本标准代替 GB 4789.42-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验 诺如病毒检验》。本标准与 GB 4789.42-2016 相比,主要变化如下: ——修改了标准的适用范围； ——增加了过程控制病毒和诺如病毒 GI基因组检测用探针； ——修改了“软质水果和生食蔬菜”的前处理步骤和检验结果的判定
GB 4789.42-2025 食品安全国家标准 食品微生物学检验 诺如病毒检验
1范围 本标准规定了食品中诺如病毒(Norovirus)的实时荧光 RT-PCR 检验方法。 本标准适用于贝类、生食蔬菜、硬质表面食品、软质水果和包装饮用水中诺如病毒的检测。
2设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下。 2.1实时荧光 PCR 仪。 2.2低温离心机:离心力>12 000×g,温度≤4 ℃,套管容积适合1.5mL/50mL离心管。 2.3无菌刀片或等效均质器。 2.4涡旋混匀仪。 2.5电子天平:感量为0.1g和0.1mg. 2.6全温振荡器或等效装置:温度范围2℃~60 ℃2.6 2.7恒温水浴锅或恒温金属浴:温度范围为室温~100℃ 2.8离心机:离心力>5 000×g,套管容积适合50mL/15ml离心管。 2.9低温冰箱:-80 ℃。 2.10 微量移液器。 2.11 pH计或精密 pH 试纸。 2.12无菌均质袋:带滤网,容积 400 mL. 2.13无菌棉拭子 2.14无菌贝类剥刀。 2.15橡胶垫。 2.16 无菌剪刀。 2.17无菌镊子。 2.18无菌培养皿。 2.19无RNase玻璃容器、无RNase离心管、无RNase移液器吸头、无RNase药匙、无RNase PCR 薄壁管:见附录E中E.1. 2.20超滤浓缩离心管(截留蛋白分子量50kD或100kD)。 2.21 无菌混合纤维素膜(孔径0.45um;直径47mm)。
3培养基和试剂 除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯;实验用水均为无RNase超纯水(见 E.2.1)。 3.1 GI和GⅡ基因组诺如病毒引物和探针:见附录 A。 3.2 过程控制病毒引物和探针:见附录 C。 3.3过程控制病毒:门哥病毒或大肠埃希氏菌噬菌体 MS2,见附录 C。 3.4外加扩增控制 RNA:见附录 D。 3.5 Tris/甘氨酸/牛肉膏(TGBE)缓冲液:见 E.2.2。 3.6 5×PEG/NaCl溶液:见 E.2.3。 3.7磷酸盐缓冲液(PBS):见 E.2.4。 3.8三氯甲烷/正丁醇混合液:见 E.2.5。 3.9蛋白酶K溶液:见 E.2.6。 3.10 75%乙醇:见 E.2.7。 3.11 Trizol试剂:见 E.2.8。 3.12盐酸(HCl)溶液(6 mol/L):见 E.2.9。 3.13氢氧化钠(NaOH)溶液(1 mol/L):见 E.2.10. 3.14果胶酶:Aspergillus niger果胶酶,活性≥5 U/mg;或 Aspergillus aculealus 果胶酶,活性≥3 800 U/mL 3.15 氯化镁。
4检验程序 诺如病毒检验程序见图 1.
5操作步骤 5.1样品处理 待检样品一般应在4 ℃以下的环境中进行运输。实验室接到样品后应尽快进行检测,如果在 24 h内不能检测,应将样品保存在一80 ℃冰箱中,实验前取出,放置室温,至样品完全解冻。样品处理和PCR检测应防止交叉污染。每个样品可设置2个~3个平行处理。样品处理过程中,要注意更换剪刀。镊子、移液器吸头等实验耗材,防止样品间的交叉污染。
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