污水中新型冠状病毒监测技术规范（WS/T 10042-2025）

附 录 B

（规范性）

结果计算

B.1 RT-qPCR 结果判定

B.1.1 靶标结果判定

当Ct值小于或等于新冠病毒核酸检测试剂盒说明书规定阈值且有S形扩增曲线时，靶标结果判定为阳性；当Ct值大于新冠病毒核酸检测试剂盒说明书规定阈值或无S形扩增曲线时，靶标结果判定为阴性。或参考产品说明书中结果判定相关要求。

B.1.2 污水样本结果判定

当同一份污水样本中新冠病毒2个靶标（ORF1ab和N）RT-qPCR检测均出现阳性检测结果，即2个靶标的3个平行样本各出现至少1个阳性检测结果，污水样本判定为阳性，例如：ORF1ab +/-/-，N -/+/-。当同一份污水样本中新冠病毒单靶标（ORF1ab或N）RT-qPCR检测至少2个平行样本出现阳性检测结果，污水样本判定为阳性，例如：ORF1ab +/+/-，N -/-/-或ORF1ab -/-/-，N +/+/-；当出现单个靶标只有1个平行样本为阳性检测结果时，应对该污水样本重新进行富集浓缩和核酸提取，并进行RT-qPCR检测，若仍出现阳性检测结果，则污水样本判定为阳性。对阳性污水样本进行新冠病毒核酸浓度计算。

B.2 新冠病毒核酸浓度计算

将核酸样本的新冠病毒核酸Ct值平均值代入新冠病毒核酸标准曲线中，计算核酸样本中新冠病毒的核酸浓度，并根据式（B.1）将核酸样本中新冠病毒核酸浓度换算成污水样本中新冠病毒核酸浓度C。

C = C₂×V₄×V₂/(V₃×V₁×H)·························· (B.1)

式中：

C ——污水样本中新冠病毒核酸浓度，单位为拷贝每毫升（copies/mL）；

C₂——经新冠病毒核酸标准曲线计算得到的核酸样本中新冠病毒核酸浓度，单位为拷贝每毫升（copies/mL）；

V₄——提取核酸得到的核酸样本体积，单位为毫升（mL）；

V₂——富集浓缩液体积，单位为毫升（mL）；

V₃——提取核酸时所用的浓缩液体积，单位为毫升（mL）；

V1——经富集浓缩处理的污水样本体积，单位为毫升（mL）；

H ——PMMoV核酸回收率，%。

参考文献

[1] 消毒剂使用指南（国卫办监督函〔2020〕147号）