钩端螺旋体病诊断标准（WS 290—2026 ）

附 录 B

（规范性）

钩端螺旋体病血清学检查

B.1 标本要求

需采集患者急性期和恢复期双份血清进行检测。急性期血清应在首次检视患者时采取，血清分离后进行第一次抗体检测。根据患者的病程（一般为3 周～4 周）获得恢复期血清后，进行第二次抗体检测，两次间隔2 周～3 周。采用显微镜凝集试验和酶联免疫吸附试验进行检测。

B.2 显微镜凝集试验（MAT）

B.2.1 抗原的选择和制备

将我国15群15型钩端螺旋体标准菌株接种于Korthof或EMJH等适宜培养基中，28℃培养5 d～7 d，暗视野显微镜检查，每400倍视野下不少于100条～200条，运动活泼并无自凝者可作为抗原。

B.2.2 操作步骤

患者血清56℃水浴灭活30 min后，用生理盐水以1∶50（早期患者血清）或1∶100（恢复期患者血清）和1∶400两个稀释度做定性试验。稀释血清以及阳性对照、阴性对照及空白对照生理盐水各取50 μL加入各反应孔中。分别取15个代表株钩端螺旋体的培养液50 μL加入上述稀释度血清及对照中。摇匀后37℃孵育1 h。取反应液及对照，放置载玻片上暗视野显微镜下观察凝集情况。若稀释血清与某一血清群钩端螺旋体抗原发生凝集，需进一步稀释该血清再与该群钩端螺旋体抗原进行显微镜凝集试验，以测定其凝集滴度，凝集滴度按原血清稀释倍数×2计算。

B.2.3 终点凝集滴度的判定

以出现＋＋凝集（即视野中50％钩端螺旋体被凝集）的血清最高稀释度作为终点凝集滴度。

B.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）

可使用商品化试剂盒，按照操作说明书进行操作。