第三法 碱水解法 14原理 用无水乙醚和石油醚抽提样品的碱(氨水)水解液,通过蒸馏或蒸发去除溶剂,测定溶于溶剂中的抽提物的质量。 15 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682 规定的三级水 15.1 试剂 15.1.1淀粉酶:酶活力≥1.5
U/mg。 15.1.2氨水(NH3·H2O):质量分数约 25%。 注:可使用更高含量的氨水。 15.1.3 乙醇(C2H5OH):体积分数至少为 95%。 15.1.4无水乙醚(C4H10O)。 15.1.5石油醚(CnH2n-2):石油醚沸程为 30 ℃～60 ℃ 15.1.6 刚果红(C32H22N6Na2O6S2)。 15.1.7 盐酸(HC1)。 15.1.8 碘(I2)。 15.1.9 碘化钾(KI)。 15.2 试剂的配制 15.2.1混合溶剂:等体积混合无水乙醚和石油醚,现用现配， 15.2.2碘溶液(0.1 mo1/L):称取 12.7g碘和25g碘化钾于水中溶解并定容至1L。 15.2.3 刚果红溶液:将1g刚果红溶于水中,稀释至 100 mL。 注:可选择性地使用。刚果红溶液能使溶剂和水相界面清晰,也可使用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。 15.2.4盐酸溶液(6 mol/L):量取 50 mL 盐酸缓慢倒人 40 mL水中,定容至 100 mL,混匀。 16 仪器和设备 16.1 分析天平:感量为 0.000
18. 16.2匀浆机或研磨机。 16.3 离心机:能放置抽脂瓶或管,转速为 500 r/min-600 r/min,能在抽脂瓶外端产生80g-90g的重力场。 16.4电热鼓风干燥箱。 16.5恒温水浴锅。 16.6摇混器:满足摇摆频率 100 次/min。 16.7干燥器:内装有效干燥剂，如硅胶。 16.8 抽脂瓶:抽脂瓶应带有软木或其他不影响溶剂使用的瓶塞(如硅胶或聚四氟乙烯)。软木基应先浸泡于乙醚中,后放人60℃或60℃以上的水中保持至少15min,冷却后使用。不用时需浸泡在水中,浸泡用水每天更换1次。 注:也可使用带虹吸管或洗瓶的抽脂管(或烧瓶),但条作步有所不同,见附录 A 中规定。接头的内部长支管下端可成勺状。 17 分析步骤 17.1 试样制备 无颗粒且均匀液体样品直接摇匀后备用,有颗粒或非均匀液体样品用匀浆机匀浆后备用,乳粉等固体样品混合均匀后备用,奶油放人温水浴中溶解并混合均匀,千酪使用研磨机粉碎。所制试样应尽快测定。 17.2 试样碱水解 17.2.1 液体和半固体样品(除炼乳、奶油、稀奶油外) 称取均匀试样5g-10g(精确至
0.0001g)于抽脂瓶中。加人2.0 mL氨水,充分混合后立即将抽脂瓶放人 65 ℃士5 ℃的水浴中,加热 15 min-20 min,不时振荡。取出后,冷却至室温。静置 30s。 17.2.2固体样品(除干酪、再制干酪外) 17.2.2.1 不含淀粉样品 称取均匀试样1g-1.5g(精确至
0.0001g),加人8mL-10 mL 65 ℃士5 ℃的水,将试样洗入抽脂瓶的小球,充分混合,直到试样完全分散,放人流动水中冷却,其余操作同
17.2.1。 17.2.2.2含淀粉样品 称取均匀试样1g-1.5g(精确至
0.000 1g),放人抽脂瓶中,加人约0.1g的淀粉酶,混合均匀后,加入8 mL-10 mL
45 ℃的水,注意液面不要太高。盖上瓶塞于搅拌状态下,置 65 ℃士5 ℃水浴中2 h,每隔 10 min 摇混1次。为检验淀粉是否水解完全可加人2滴约 0.1 mol/L的碘溶液,如无蓝色出现说明水解完全,否则将抽脂瓶重新置于水浴中,直至无蓝色产生。抽脂瓶冷却至室温。其余操作同17.2.1。 17.2.3 炼乳 脱脂炼乳、全脂炼乳和部分脱脂炼乳称取3g-5g、高脂炼乳称取约1.5g(精确至 0.0001g),用10
mL水,分次洗人抽脂瓶小球中,充分混合均匀。其余操作同 17.2.1。 17.2.4奶油、稀奶油 称取均匀试样约0.5 g(精确至 0.000
1g),稀奶油称取约1g于抽脂瓶中,加人8 mL-10 mL 约45 ℃的水。其余操作同 17.2.1. 17.2.5 干酪、再制干酪 称取约 2g均匀试样(精确至0.0001g)于抽脂瓶中,加10
mL6 mol/L 盐酸,混匀,盖上瓶塞,于沸水中加热 20 min-30 min;取出冷却至室温,静置 30 s. 17.3 抽提 17.3.1 加入10 mL乙醇,缓和但彻底地进行混合,避免液体太接近瓶颈。如果需要,可加人2滴刚果红溶液。 注:对黏稠度较高的样本保温结束后,需趁热加人乙醇,并采用边加边摇的方式彻底混合。 17.3.2 加人25 mL乙醚,塞上瓶塞,将抽脂瓶保持在水平位置,小球的延伸部分朝上夹到摇混器上,按约 100 次/min 振荡1min,也可采用手动振摇方式或其他自动振摇方式。但均应注意避免形成持久乳化液。抽脂瓶冷却后,小心地打开塞子,用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈,使冲洗液流人抽脂瓶。 17.3.3 加人 25 mL 石油醚,塞上重新润湿的塞子,按 17.3.2所述,轻轻振荡 30 s。 17.3.4 将加憙的抽脂瓶放人离心机中,在
500 r/min-600 r/min 下离心5 min,否则将抽脂瓶静置至少 30 min,直到上层液澄清,并明显与水相分离。 17.3.5 小心地打开瓶塞,用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁,使冲洗液流人抽脂瓶。如果两相界面低于小球与瓶身相接处,则沿瓶壁边缘慢慢地加人水,使液面高于小球和瓶身相接处[参见附录
B中图 B.1a)],以便于倾倒。 17.3.6 将上层液尽可能地倒入已准备好的加人沸石的脂肪收集瓶中,避免倒出水层[参见图 B.1b)] 17.3.7用少量混合溶剂冲洗瓶颈外部,冲洗液收集在脂肪收集瓶中。应防止溶剂溅到抽脂瓶的外面。 17.3.8 向抽脂瓶中加人5 ml乙醇,用乙醇冲洗瓶颈内壁,按 17.3.1 所述进行混合。重复
17.3.2-17.3.7 操作,用 15 mL无水乙醚和 15 mL石油醚,进行第2次抽提。 17.3.9 按照 17.3.8 操作;进行第3次抽提。 注:若产品中脂肪的质量分数低于5%(除发酵乳等较黏稠样品外),只需进行2次抽提。 17.3.10 空白试验与样品检验同时进行,采用10 mL水代替试样,使用相同步骤和相同试剂。
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